Crioconservarea embrionilor pentru eco

Dezvoltarea modernă a tehnologiei medicale contribuie la dezvoltarea unor noi abordari pentru tratamentul infertilității. Deci, utilizate pe scară largă în practica clinică, am primit una dintre metodele de susținere a tehnicilor de reproducere - crioconservarea spermei, embrioni, ovocite. În acest articol ne vom uita la un nou tip modern, de pregătire pentru fertilizarea embrionilor sau a spermei cu ajutorul congelata cu azot lichid.

Video: Crioconservarea embrionilor

Această metodă într-o anumită măsură, contribuie la rezolvarea problemelor de conservare și utilizare viitoare a materialului biologic, care rămâne neutilizat în timpul ciclurilor de fertilizare in vitro. Într-adevăr, la temperaturi scăzute, embrionii sunt stocate într-un stat viabil nu este violată activitatea lor metabolică și eficiență, adică implantarea la nivel nu este inferior în programele de fertilizare in vitro, folosind probe biomateriale proaspete.

În lumea de practica medicala, a acumulat o experiență considerabilă în realizarea sarcinii prin dezghetare si fertilizare a ovocitelor mature. Până de curând, a fost utilizat ca dimetilsulfoxid crioprotector reactiv (DMSO) și un circuit de răcire lentă și decongelare rapidă. Ulterior oțel aplica propandiol (PrOH), apoi - o combinație propandiol și zaharoză, care sa transformat în primul kit comercial pentru congelare și decongelare ovocitului.

Probleme de congelare de celule

În același timp, tehnologia de congelare de celule nu este încă suficient de dezvoltată, și, astfel, îmbunătățirea acesteia este o problemă urgentă, care necesită decizii ulterioare. Dificultăți crioconservarea celulelor ou mature sunt conectate:

• cu o cantitate semnificativă de citoplasma;
• conținut ridicat de apă în celulă;
• starea cromozomilor în metafaza meiozei sunt foarte sensibile la temperatură și vibrații osmotice prin congelare, și (foarte important) decongelare.

Cauza principală a deteriorării celulelor în timpul congelare și decongelare este formarea de cristale de gheață în interiorul celulei. S-ar părea că deshidratarea celula poate rezolva această problemă, dar eliminarea prea multa apa este, de asemenea, considerate a fi distructive pentru celule.

Video: Crioconservarea embrionilor: de ce această procedură

Este cunoscut faptul că punctul de îngheț al apei, care conține diverși ioni sub 0 ° C și depinde de concentrația lor. In celulele crioconservare expuse porțiunea din moleculele de apă de cristalizare, care crește concentrația și, astfel, reduce temperatura de congelare.

Creșterea nivelului presiunii osmotice celula are de asemenea un efect devastator. Astăzi demonstrat fără echivoc că factorul deteriorarea celulelor nu este o temperatură scăzută, iar cristalele de gheață sunt formate în zona termică definită prin congelare și decongelare.

Care este procesul de congelare a celulelor folosind cryotechnology?

Procesul de material înghețat are loc în principal în două moduri:

1. Metoda lentă de crioconservare.
2. Metoda crioconservare neechilibrată, care constă din crioconservare ultrarapid și vitrificarea.

Metoda crioconservare lentă, realizată în etape, metoda cea mai comună de congelare embrioni umani. Cu răcire lentă, are loc deshidratarea celulară în trepte, ceea ce ajută la reducerea riscului de cristale mari de gheata intracelulare.

Datorită crioprotectori gradientului osmotic „tras“ din celulele de apă, care îngheață în spațiul intercelular. Cu siding mână (însămânțare) este utilizat pentru a preveni formarea spontană a gheții. Forceps atinge paie, care conține o soluție la celule la o temperatura de -6,5 ° C, urmată de o expunere zece minute la temperatura de cristalizare.

Prin urmare, la o temperatură de -35 ° C embrioni au fost plasate în azot lichid, unde etapa finală de congelare și în care embrionii pot fi stocate până la utilizare.

Cu toate acestea, riscul de deteriorare a embrionilor datorate inter- și cristalizarea intracelulara este suficient de mare. În plus, metoda de crioconservare lentă se realizează cu echipamente speciale, care costuri ridicate.

Metode pentru prepararea de embrioni congelați pentru FIV

ultrarapide metode crioconservare sunt după cum urmează. Embrionii care au fost în soluție dimetilsulfoxid și zaharoză se transferă într-un azot lichid cristale de gheață fine se formează ulterior, se topesc la temperaturi mai scăzute.

Metoda de vitrificare (lat Vitrum -. Sticlă) este de a transforma lichidul într-un proces în stare solidă care rezultă într-o creștere extremă a viscozității în timpul celule de răcire, nu cristalizează, adică Vitrificare - o înghețare fără formarea de cristale de gheata. În vitrificare, nu numai procesul de răcire este mult simplificată, dar riscul dispare daune chimice și fizice cauzate de cristalizare inter- și intracelular.

Această metodă se realizează cu ajutorul unui lichid vitrificare, care constă din două tipuri de cryoprotectants:

Video: FIV pas cu pas. embrioni de congelare

• soluție cu o concentrație mare de crioprotector care poate penetra membrana celulei (propilenglyukol, glicerol, etilen glicol);
• Soluție malopronikayuschego crioprotector pentru celulele de deshidratare (polietilenglyukol, Ficoll, zaharoză).

concentrația de crioprotector este atât de mare încât o răcire prea rapidă la -196 ° C, vâscozitatea lichidului este mult crescut.

Este important ca pentru vitrificare, spre deosebire de crioconservare lent, utilizați aceleași soluții, indiferent de stadiul de dezvoltare a ovocitelor sau a embrionilor. Practic procesul de vitrificare este plasarea de ovocite sau embrioni pentru mediu vitrificare, dar pentru un timp foarte scurt, pentru a evita efectele toxice datorită în continuare congelarea ultrarapida.

Astfel, metoda de vitrificare nu necesită costuri semnificative de logistică, și este convenabil pentru utilizarea practică. Atunci când procesul de răcire vitrificare este mult simplificată, care împiedică dezvoltarea celulelor daune fizice și chimice ca urmare a formării de cristale inter- și intracelulare.

Video: Doar despre FIV: Crioprezervare. Cine are nevoie? ovocitelor bancare

Ca concluzie, am dori să spunem că vitrificare fertilizarea in vitro poate fi considerată ca o alternativă pentru a încetini protocolul de congelare. Sperăm că în viitorul apropiat va fi dovedită în mod clar avantaj față de vitrificare congelare lent.